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限制性内切酶为什么能检测碱基序列改变  

2013-06-18 12:56:41|  分类: 现代生物科技 |  标签: |举报 |字号 订阅

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因为每一种限制性内切酶在切割DNA分子是都有固定的切点序列,这里的切点序列既碱基序列,当碱基序列改变时,便导致该酶的切点的消失或产生,最后使切掉的限制性片段长度发生变化,这里的变化可由仪器检测。例如限制酶MstⅡ所识别的DNA碱基序列是CCTGAGG,而这是正常β珠蛋白基因(βA)第6个密码子及其前后的碱基序列。经MstⅡ切开,形成1.15kb和0.2kb两个片段。但当正常β珠蛋白基因突变为镰形细胞贫血基因(βS)时,第6个密码子GAG突变为GTG,于是CCTGAGG变成 CCTGTGG,而不能被MstⅡ所识别,以致酶切时产生1.35kb的DNA片段。据此,可以对镰形细胞贫血症进行诊断.
镰刀形细胞性贫血症的基因诊断
一.可采用PCR-限制性内切酶谱分析法,先用PCR从患者基因组DNA扩增含突变位点的珠蛋白基因片段,再选择适当的限制性内切酶水解PCR产物,根据酶切产物在电泳图谱上的片段数量和大小做出判断.
二,也可与特意的寡核苷酸探针进行Southern印记杂交分析,根据杂交图谱做出判断.
三, PCR扩增后直接测序;
四变性高效液相色谱法。
 
例1镰刀型细胞贫血症的病因是血红蛋白基因的碱基序列发生了改变。检测这种碱基序列必须用的酶是

 

A.解旋酶
B.DNA连接酶
C.限制性内切酶
D.RNA聚合酶

例2

MstⅡ是一种限制性内切酶,它总是在CCTGAGG的碱基序列中切断DNA。下图显示用MstⅡ处理后的突变型 血红蛋白基因片段。镰刀型细胞贫血症的根本原因是 血红蛋白发生基因突变,使某一处CCTGAGG突变为CCTGTGG。下列有关叙述错误的是    (    )
  ____________  ________________   ___________


A.利用Mst 1I酶进行基因诊断,该过程是在细胞外进行的
    B.将MstⅡ酶用于基因诊断,若产生四个DNA片段,则 血红蛋白基因是正常的
    C.在起初的正常 血红蛋白基因中有4个CCTGAGG序列
    D.镰刀型细胞贫血症患者的成熟红细胞中没有MstⅡ酶的识别序列
【答案】C
【解析】:基因诊断的方法不再说了图示显示MstⅡ处理后的突变型 血红蛋白基因片段有3段,正常的 血红蛋白基因比异常的多了一个MstⅡ的识别序列,若用MstⅡ酶进行基因诊断,会多出1个DNA片段,说明正常 血红蛋白基因中有3个CCTGAGG序列。镰刀型细胞贫血症患者的成熟红细胞中没有DNA,更谈不上有MstⅡ酶的识别序列。


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